快速非培養法檢測真菌具有重要的意義，真菌通用PCR試劑盒就是根據 PCR 原理開發的專門檢測真菌的試劑盒。

真菌通用PCR試劑盒

產品內容：

產品優勢：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.產品經過精心優化，分析靈敏度高，可以達到 100 拷貝/反應。

3.提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4.特異性高，引物是根據真菌通用 DNA 高度保守區設計，不會跟除此之外的其它 DNA 發生交叉反應。

5.本產品足夠 50 次 20 ?L 體系的 PCR 反應。

6.本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7.本產品只能用于科研。

儲存條件及有效期：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 24 個月。

自備試劑：

樣品 DNA

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取反應，多出的兩個中一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10 ?L 真菌通用 PCR 陽性對照（1×10E7 拷貝/?L，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于  所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對照。

2.用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數 DNA-提取試劑盒兼容。也可以選用本公司的核酸-提取試劑盒或免提取核酸釋放劑。

應用范圍：

常規PCR；T/A克隆；菌落PCR鑒定。

PCR過程：

1.變性

當反應混合物加熱0.5至2分鐘至94°C時，發生變性。

由于 DNA 兩條鏈之間的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

單條 DNA鏈現在充當合成其他 DNA鏈的模板。

2.退火

持續約20至40秒，反應溫度降至54至60℃。

在這種情況下，引物附著在模板 DNA的互補序列上。

引物序列是20-30個堿基長的單鏈 DNA或RNA片段。

它們充當 DNA生產的前體。

有兩個引物-正向引物和反向引物一一兩條分離的鏈以相反的方向延伸。

3.延伸

在此階段溫度升高至72至80攝氏度之間。

Taq聚合酶將堿基固定到引物的3'未端。結果,DNA從5'延伸至3'。

Taq聚合酶可以承受極-高的溫度。結果產生雙鏈DNA分子。

為了在短時間內獲得多個感興趣的 DNA序列，這三個過程需要進行20-40次。

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