1. 對于液體病毒樣品:在 1.5 mL 離心管中加入 0.1-0.2 mL 液體病毒樣品。如果 病毒需要富集,可以將 1.5 mL 液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘,移棄 1.3 mL 后剩下的 0.2 mL 用于第 2 步處理。 對于拭子樣品:將一個拭子放入離心管中,加入 1mL 自備的生理鹽水,振蕩器 上充分振蕩半分鐘,然后轉移 0.2 mL 到 1.5 mL 塑料離心管中,用于第 2 步處 理。
2. 加入 0.6 mL 溶液 A 得到的 0.2 mL 樣品中,振蕩 30 秒混勻后室溫放 置 10 分鐘。注意:溶液 A 在 4℃放置后可能會產生沉淀,使用前必須放在 65℃ 水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
3. 短暫離心后將 500 uL 溶液轉移到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。
5. 將剩余溶液短暫離心后全部轉移到步驟 3 的離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘,棄收 集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
8. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘(干甩),棄含穿透液的離心管。
9. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的 RNase-free 的 1.5 mL 離心管中,在 離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL 洗脫液,然后室溫放置 2 分鐘。
10. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,離心管中的溶液即為病毒 DNA 和 RNA 溶液。