ELISA實(shí)驗(yàn)操作流程

前期準(zhǔn)備工作：

實(shí)驗(yàn)前樣本和試劑盒室溫平行1小時(shí)，如果樣本是凍存樣本，應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進(jìn)行解凍（不建議直接室溫解凍）

準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需耗材，蒸餾水（去離子水）。

操作流程描敘：

1. 將要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的版孔進(jìn)行設(shè)定好，標(biāo)準(zhǔn)品5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)設(shè)定平行，需要用到10個(gè)孔，空白只需1個(gè)孔。剩下孔可以做為樣本孔
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)備好5個(gè)EP管，然后在每個(gè)EP管中加入150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號(hào)管中加入150標(biāo)準(zhǔn)品，用槍頭反復(fù)吹打10次左右（注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號(hào)管中取150微升加入到2號(hào)管，后面過程一次類推。最后稀釋完，前面4個(gè)管中每管液體在150微升，5號(hào)管為300微升。濃度是從大到小。
3. 標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白加樣：標(biāo)準(zhǔn)是每個(gè)濃度點(diǎn)2個(gè)孔（做平行），每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入50微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是，標(biāo)準(zhǔn)加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內(nèi)加完，如果時(shí)間拖的太長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng)，這樣數(shù)值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘.
4. 洗版，在孵育過程中可以將洗滌液配好，20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震蕩儀的話，可以講板子放入震蕩儀上5秒左右，然后靜止三十秒，沒有請(qǐng)忽略次過程）將板子在桌子上晃動(dòng)5秒左右，然后靜置30秒，甩干，拍板。說明：甩干過程盡量要快，1秒內(nèi)就可以完成，不要慢慢傾斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。
5. 每孔加入50微升的酶標(biāo)試劑，此處在空白孔中不需要加（空白孔為空），孵育30分鐘。
6. 洗版同步驟4
7. 顯色，先每孔中加入50微升的顯色A液，然后每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘
8. 終止，每孔加入50微升的終止液，注意，加完終止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù)，超過時(shí)間讀數(shù)無效。在規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。

至此，整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束

需要額外提醒的是：在做完整個(gè)實(shí)驗(yàn)過儀器之前，儀器最好預(yù)熱半小時(shí)，這個(gè)計(jì)算好時(shí)間，也可以直接將儀器一直開著，直到整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部，一般槍頭都懸空，可以將槍頭靠在孔邊緣，但槍頭尖懸空，如果槍頭上殘留液體看整體多少量，不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔。整個(gè)加液過程不要產(chǎn)生氣泡。（洗滌液除外）