哪些情況需要使用穩(wěn)定細(xì)胞系

　　穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中，使外源基因能夠在宿主細(xì)胞中長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，這樣的細(xì)胞系稱為穩(wěn)定細(xì)胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上，通過轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，外源基因整合到宿主染色體上，用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細(xì)胞。在試驗(yàn)過程中，常用的真核表達(dá)載體抗性篩選標(biāo)志物有嘌呤霉素(puromycin)、新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)等。通過篩選可得到符合實(shí)驗(yàn)要求的穩(wěn)定高表達(dá)目的蛋白細(xì)胞株或者穩(wěn)定沉默目的基因的細(xì)胞株。
 

　　其建立的原理是，將我們所要的目的基因真核到宿主細(xì)胞上，隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖，目的基因可以穩(wěn)定的表達(dá)，在通過抗生素的不斷加壓篩選，得到構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的過程。相對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)持續(xù)周期長(zhǎng)，細(xì)胞整合穩(wěn)定，能夠滿足后期對(duì)蛋白的大量需求。
 

　　以下情況需要使用穩(wěn)定細(xì)胞系：
 

　　1、實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，要求外源DNA在分裂細(xì)胞中長(zhǎng)期表達(dá)，>2周。
 

　　2、需要構(gòu)建誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。當(dāng)目的基因的過表達(dá)或者干擾需要時(shí)空特異性，或者會(huì)引起細(xì)胞毒性等不利影響。
 

　　3、基因敲除/插入等修飾宿主細(xì)胞基因組的實(shí)驗(yàn)。
 

　　4、篩選拷貝數(shù)適宜的細(xì)胞。
 

　　5、對(duì)于某些很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類。即使病毒載體也無法實(shí)現(xiàn)高效率轉(zhuǎn)導(dǎo)。
 

　　6、通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果。
 

　　7、后續(xù)實(shí)驗(yàn)中需要將轉(zhuǎn)染細(xì)胞注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。
 

　　8、需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株可以去除個(gè)體差異。